Die Staatsanwaltschaft Darmstadt wird geführt von einer Leitenden Oberstaatsanwältin und deren Stellvertreter.
Die Stammbehörde in Darmstadt besteht aus elf Abteilungen, die jeweils von einer Oberstaatsanwältin oder einem Oberstaatsanwalt geleitet werden. Jeder Abteilung gehören bis zu neun Staatsanwältinnen oder Staatsanwälte und/oder Amtsanwältinnen oder Amtsanwälte an, die die einzelnen Verfahren bearbeiten, ferner Rechtspflegerinnen und Rechtspfleger, die überwiegend für die Strafvollstreckung zuständig sind.
Unterstützt werden alle dabei durch die jeweiligen Sekretariate, die die Verfahrensakten verwalten und die übrigen Büroarbeiten erledigen. Die nach der Geschäftsverteilung zuständigen Sekretariatsmitarbeiter stehen bei telefonischer Kontaktaufnahme als erste Ansprechpartner zur Verfügung.
Weitere Bedienstete der Stammbehörde in Darmstadt sind in den Bereichen Asservatenstelle und als Justizwachtmeister tätig.